Buồng đếm hồng cầu – Cấu tạo, cách sử dụng

Buồng đếm hồng cầu được sử dụng đếm số lượng tế bào trực tiếp nhằm xác định số lượng nhóm sinh vật. Đây là phương pháp xác định số lượng tế bào trực tiếp của các nhóm vi sinh vật. Tại nội dung bài viết sau đây LabVIETCHEM sẽ chia sẻ thông tin cụ thể về thiết bị phân tích vi sinh này đến các bạn. 

1. Buồng đếm hồng cầu là gì?

Buồng đếm hồng cầu là phương pháp trực tiếp để xác định số lượng chung của các nhóm vi sinh vật có trong đất, nước, không khí; dịch nuôi cấy, hoặc các môi trường tương tự. Phương pháp này đếm số lượng tế bào trực tiếp trên kính hiển vi. 

Hình 1: Buồng đếm hồng cầu là phương pháp xác định số lượng chung của các nhóm vi sinh vật

Cho phép người dùng đếm số lượng vi sinh vật kích thước lớn như: Tảo đơn bào, nấm men, bào tử vi nấm mốc. Tuy nhiên buồng đếm hồng cầu không dùng để đếm vi khuẩn. Phương pháp này chỉ dùng đếm tổng số lượng tế bào, không thể phân biệt được tế bào sống hay chết. 

2. Cấu tạo buồng đếm hồng cầu

Buồng đếm hồng cầu có hình chữ nhật, là một phiến kính trong, dày. Buồng đếm được thiết kế chia làm 3 phần: Phần lõm ở giữa, và phẳng chia làm 2 khoảng nhỏ. Mỗi khoảng này có kẻ lưới đếm, bao gồm 400 ô nhỏ. Với thể tích của mỗi ô nhỏ là 1/4000 mm³, tương đương với 1/4000.000ml. Buồng đếm hồng cầu có hai loại: Buồng đếm thông thường và Buồng đếm tráng bạc. 

Ưu điểm của buồng đếm tráng bạc là giúp tế bào vi sinh vật hiển thị rõ hơn khi được quan sát qua kính hiển vi. Các yếu tố như chất lượng của buồng đếm (bao gồm cả tình trạng lão hóa và trầy xước); hoặc chất lượng của kính hiển vi (bao gồm cả độ sáng của nguồn ánh sáng và chất lượng của ống kính) có thể ảnh hưởng đến kết quả quan sát trên buồng đếm.

Hình 2: Cấu tạo buồng đếm hồng cầu

3. Cách đếm tế bào bằng buồng đếm hồng cầu

Cách xác định tế bào trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu bao gồm các bước sau đây: 

• Bước 1: Pha mẫu cần đếm thành dung dịch loãng sao cho mỗi ô nhỏ của buồng đếm chứa khoảng 5-10 tế bào, và ô lớn chứa từ 10-50 tế bào.
• Bước 2: Lắc đều ống nghiệm chứa dung dịch mẫu loãng. Tiếp theo, thả một giọt dung dịch vào giữa buồng đếm và nhẹ nhàng tráng đều dung dịch để nó tràn đều vào khoang đếm.
• Bước 3: Đặt phiến kính lên trên buồng đếm, nhấn nhẹ để kín chặt mà không gây bọt khí lọt vào.
• Bước 4: Đặt buồng đếm lên bàn soi dưới kính hiển vi.
• Bước 5: Sử dụng kính hiển vi để đếm số lượng tế bào trong dung dịch sau khoảng 3-5 phút kể từ khi đã nhỏ giọt dung dịch vào buồng đếm.

Hình 3: Cách xác định tế bào trực tiếp bằng buồng đếm hồng cầu

4. Phân loại buồng đếm hồng cầu

Buồng đếm hồng cầu được phân loại theo kiểu kẻ của buồng đếm và kiểu lưới ô của buồng đếm. Cụ thể: 

4.1. Phân loại buồng đếm hồng cầu theo kiểu kẻ

Buồng đếm hồng cầu có hai kiểu đường kẻ chia ô buồng đếm bao gồm: 

• Vạch sáng: Trên bề mặt buồng đếm lưới ô đếm được khắc vào một lớp màng kim loại mỏng được tạo bằng hơi, có các đường ranh giới. Các vạch ranh giới ô đếm có tính tương phản tốt với nền kim loại tối, hiện lên màu sáng rõ dưới kính hiển vi. 
• Vạch tối: Lưới ô vuông có các đường ranh giới được khắc vào bề mặt thuỷ tinh, khi nhìn qua kính hiển vi thì các đường ranh giới này có màu tối.

4.2. Phân loại kiểu lưới ô của buồng đếm hồng cầu

Nếu phân loại kiểu lưới ô của buồng đếm hồng cầu sẽ có các loại phổ biến sau đây: 

4.2.1. Buồng đếm hồng cầu Neubauer cải tiến

Buồng đếm tế bào Neubauer được sử dụng phổ biến nhất với độ sâu chuẩn là 0,1mm. Buồng đếm có 9 ô vuông lớn, mỗi ô 1mm2. Ở trung tâm ô vuông lớn được chia thành 25 nhóm ô vuông, mỗi cạnh dài 0.2mm. Những nhóm ô vuông được chia thành 16 ô vuông nhỏ, mỗi ô có diện tích là 0.05*0.05 mm = 0.0025 mm2. 

4.2.2. Buồng đếm hồng cầu Buerker

Buồng đếm hồng cầu Buerker có độ sâu vào khoảng 0.1mm. Lưới ô đếm rộng 9mm2, được chia thành 9 vùng lớn bởi ranh giới bởi 3 vạch kẻ. Mỗi vùng lớn được chia thành 16 vùng nhỏ (diện tích là 0.2*0.2 mm2) bởi vạch kép với 0.05mm. Các đường đôi giao cắt tạo thành ô vuông nhỏ (diện tích là 0.05*0.05 mm2).

4.2.3. Buồng đếm hồng cầu Fuchs – Rosenthal

Buồng đếm tế bào Fuchs – Rosenthal có độ sâu là 0.2 mm. Vùng lưới ô vuông phủ 16mm2, chia thành 16 ô lớn, mỗi cạnh dài 1mm. Các ô vuông lớn được tách biệt bởi ba đường, cách nhau 0.01 mm. Các đường trung tâm có khoảng cách 1mm. Buồng đếm có 16 ô vuông lớn được chia thành 16 ô vuông nhỏ, cạnh dài 0.25 mm. 

4.2.4. Buồng đếm hồng cầu Thoma

Buồng đếm hồng cầu Thoma có độ sâu là 0.1 mm. Diện tích vùng ô đếm tế bào là 1*1 mm2. Buồng đếm được chia thành các nhóm ô vuông, chiều dài cạnh là 0.2 mm. Nhóm ô vuông được chia thành 16 ô vuông nhỏ (diện tích 0.05*0.05 mm = 0.0025 mm2)

4.2.5. Buồng đếm tế bào Malassez

Buồng đếm hồng cầu Malassez có độ sâu là 0.2 mm. Vùng ô đếm hình chữ nhật lớn (diện tích là 0.25*0.2 = 0.05 mm2). Diện tích vùng ô đếm là 2*2.5 mm2. Mỗi ô chữ nhật được chia thành 20 ô chữ nhật nhỏ (diện tích là 0.05*0.05 mm = 0.0025 mm2)

LabVIETCHEM vừa chia sẻ thông tin về buồng đếm hồng cầu đến các bạn thông qua nội dung bài viết. Đơn vị của chúng tôi hiện đang phân phối chính hãng các dòng buồng đếm tế bào đến từ các thương hiệu hàng đầu. Liên hệ ngay đến LabVIETCHEM để được tư vấn và hỗ trợ.