HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao

HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao là phương pháp được sử dụng để phân tích, phân tách, nhận biết và định lượng các thành phần có trong hỗn hợp chất. Kỹ thuật này được dùng rất phổ biến trong các phòng thí nghiệm, viện nghiên cứu. Hãy cùng tìm hiểu về phân loại và ứng dụng của phương pháp này qua bài viết dưới dây.

1. HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao là phương pháp gì?

HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một dạng sắc ký lỏng cột được cải tiến hiện đại, thay vì dung môi được chảy dưới áp suất của các trọng lực, khi đó dung môi chảy với áp suất cao lên đến 400 atm, là đum tăng tốc độ chảy của dung môi pha động. Phương pháp này dựa trên hệ thống bơm để có thể dung môi lỏng dưới áp suất cao trong các dung môi có chứa các hỗn hợp mẫu vật qua các cột sắc ký. 

Cột sắc ký được bằng vật liệu hấp phụ rắn. Mỗi một thành phần trong các mẫu tương tác đối khác nhau với các vật liệu hấp thụ, nên có tốc độ dòng của mỗi thành phần khác nhau. Các thành phần trong mẫu tương tác mạnh với pha tĩnh sẽ có thể di chuyển chậm hơn so với các thành phần có sự tương tác yếu hơn.

HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một kỹ thuật phân tích phổ biến

2. Phân loại HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được phân loại dựa trên các cơ chế tách của các pha tĩnh, có những loại như sau:

2.1 Sắc ký lỏng hiệu năng cao hấp thụ

Pha tĩnh thường là chất rắn có khả năng hấp phụ, thông thường là hợp chất vô cơ phân cực như Silica, nhôm oxit hoặc các chất không có phân cực như than hoạt tính.

Cột sắc ký hấp phụ thường dùng để phân tích những hợp chất hữu cơ, phần lớn là các chất tan trong dung môi, ít tan trong nước, hấp phụ tốt những sản phẩm như dầu mỏ, các axit béo, este, các amin thơm và các hợp chất hữu cơ khác.

2.2 Sắc ký lỏng hiệu năng cao phân bổ

HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao được phân bổ bao gồm cột pha đảo và cột pha thường.

-  Cột pha đảo: Pha tĩnh ít phân cực và hầu như không phân cực do được gắn thêm các nhánh hidrocacbon dài trên các bề mặt các chất nhồi như các ankyl dây dài hoặc các nhóm ankyl ngắn hơn như C2, C4. Đây là kỹ thuật phân tích các hợp chất ít phân cực, phân cực trung bình, chất béo, axit béo, các amino axit, carbohydrate, nucleotide,…

-  Cột pha thường: Sử dụng để tách và phân tích các hợp chất có độ phân cực cao với các phân tử lượng vừa phải và không quá lớn, các đồng phân của hợp chất tocopherol hoặc các hợp chất đường.

2.3  Sắc ký lỏng hiệu năng cao rây phân tử

Cột sắc ký được nhồi bằng các vật liệu có kích thước lỗ rỗng chọn lọc chính xác và các hạt được phân tách dựa theo kích thước phân tử của nó. Các phần tử lớn hơn hoặc có thể nhanh chóng được rửa giải qua cột. Còn các phân tử nhỏ đi qua các lỗ rỗng của hạt nên đường đi lâu hơn và sẽ đi ra cột lâu hơn.

2.4 Sắc ký lỏng hiệu năng cao trao đổi ion

Kỹ thuật này được sử dụng gần như độc quyền với các mẫu ion hoặc các ion hoá. Điện tích trên mẫu càng mạnh thì sẽ bị hút mạnh hơn với các bề mặt ion. Vì vậy, nó sẽ được lưu giữ với thời gian hơn để có thể rửa giải. Với pha động là các dung dịch đệm và được kiểm soát cả PH và cường độ ion.

Có rất nhiều loại HPLC

3. Các tính năng của HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Cột sắc ký chính là một phần quan trọng nhất trong một thiết bị sắc ký, là nơi xảy ra các quá trình tách các chất. Cột sắc ký là ống nhồi chất hấp thụ pha tĩnh và là nơi đã xảy ra sự tiếp xúc với các mẫu dung môi của pha động. Các thành phần khác nhau của mẫu tương tác với các chất hấp thụ pha tĩnh với các lực khác nhau, kéo theo thời gian ra khỏi các cột khác nhau.

HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao để phân tích và tách có thể tích vừa và nhỏ được đưa vào dòng pha động đang thấm qua cột. Những thành phần của các mẫu đi qua cột với tốc độ khác nhau đây được xem là chức năng của những tương tác vật lý cụ thể với chất hấp phụ của cột hay gọi là pha tĩnh. 

Tốc độ của từng loại thành phần phụ thuộc vào bản chất hoá học tự nhiên nó trên pha tĩnh và thành phần của pha động. Thời gian lưu được đo trong các điều kiện đặc trưng và được xem là đặc điểm để nhận biết của chất đem phân tích.

HPLC có rất nhiều tính năng rất nổi bật 

4. Ưu điểm của phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Ưu điểm của HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao có độ nhạy cảm cao và có khả năng định lượng tốt mức độ chính xác cao. Đặc biệt phù hợp để tách các chất bay hơi và các loại chất dễ bị phân huỷ nhiệt. HPLC là một trong những công nghệ chiếm ưu thế và được sử dụng rất phổ biến trong các phòng thí nghiệm phân tích trong hơn 30 năm qua. Hệ thống HPLC xử lý áp suất lên đến 6000 psi.

Đây là một kỹ thuật có khả năng định lượng đồng thời các chất có độ phân cực gần nhau và đầu dò hiệu năng cao, độ nhạy cao. Phương pháp rất hữu hiệu trong định lượng các hợp chất hữu cơ có nhiệt thủy phân thấp.

HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao có khả năng phân tách được nhiều loại chất khác nhau và được áp dụng được phổ biến trong nhiều ngành và nhiều lĩnh vực. Kỹ thuật này rất tiện lợi, dễ sử dụng và thích hợp sử dụng với nhiều chất khác nhau, đặc biết các chất có khả năng bay hơi kém hay các chất có khả năng phân hủy ở nhiệt độ cao.

5. Ứng dụng của phương pháp HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được ứng dụng trong rất nhiều lĩnh vực khác nhau, cụ thể như sau:

-  Ứng dụng dược phẩm: Giúp kiểm soát sự ổn định của thuốc. Nghiên cứu các dược động học của các dạng bào chế dược phẩm và kiểm soát chất lượng của sản phẩm.

-  Ứng dụng môi trường: Phương pháp giúp phát hiện các hợp chất phenolic có trong nước uống và theo dõi sinh học các chất ô nhiễm.

-  Ứng dụng trong Pháp y: Đây là kỹ thuật có khả năng định lượng thuốc có trong mẫu sinh học. Sắc ký lỏng hiệu năng cao sẽ giúp xác định steroid trong máu, nước tiểu. 

-  Ngoài ra còn giúp phân tích về thuốc nhuộm ngành dệt. Xác định cocaine và các loại thuốc khác có trong máu hay nước tiểu.

-  Ứng dụng trong thực phẩm: Giúp định lượng nước giải khát và nước. Phương pháp còn giúp phân tích lượng đường trong nước ép trái cây, các chất đa vòng, chất bảo quản.

-  Ứng dụng trong xét nghiệm lâm sàng: Phương  pháp giúp phân tích nước tiểu, phân tích các kháng sinh trong máu, bilirubin, biliverdin trong rối loạn gan, phát hiện Neuropeptide nội sinh trong dịch ngoại bào của não.

Phương pháp HPLC ứng dụng trong nhiều lĩnh vực

6. Cách sử dụng phương pháp Sắc ký lỏng hiệu năng cao

Trước tiên người dùng cần xác định khối lượng nguyên tử của chất mình cần phân tích. Thông thường các hợp chất sẽ được chia làm 2 loại là loại có khối lượng phân tử nhỏ và loại có khối lượng phân tử lớn. Sau đó người mua cũng cần xem chất cần phân tích có tan trong nước gọi chất phân cực hay tan trong dung môi hữu cơ là không phân cực. Cuối cùng là cân nhắc phương pháp tách sẽ giúp người mua thu hẹp lại phạm vi lựa chọn loại cột cho mình.

7. Giá thành của phương pháp 

Cột sắc ký một thiết bị sắc ký quan trọng và là nơi diễn ra quá trình tách các chất. Hiện nay trên thị trường cột sắc ký lỏng có nhiều mẫu mã và kích thước khác nhau. Ngoài ra, còn có nhiều phụ kiện như hộp bảo vệ cột phất tích sắc ký lỏng hiệu nâng  cao. Với mức giá dao động với các khoảng 7.300.000 VNĐ đến 18.000.000 VNĐ.

8. Nên mua phụ kiện sắc ký lỏng hiệu năng cao ở đâu uy tín và chất lượng

Nhiều người muốn mua các thiết bị sắc khí kỹ và chưa biết địa chỉ ở đâu chất lượng và không biết mua ở đâu chất lượng và uy tín. LabVIETCHEM là một địa chỉ cung cấp các sản phẩm chính hãng với giá cả hợp lý chắc chắn sẽ làm hài lòng khách hàng.

LabVIETCHEM là địa chỉ cung cấp nhiều phụ kiện sắc ký lỏng hiệu năng cao

Bài viết trên đây là những thông tin chi tiết về phương pháp HPLC - Sắc ký lỏng hiệu năng cao. Đây là phương pháp hữu hiệu có rất nhiều ứng dụng trong các lĩnh vực khác nhau.